Екатерина Валериановна Ченцова — д-р мед. наук, профессор,начальник отдела травматологии и реконструктивной хирургии
ул. Садовая-Черногрязская, д. 14/19, Москва, 105062
Ekaterina V. Chentsova — Dr. of Med. Sci., professor, head of the department of traumatology and reconstructive surgery
14/19, Sadovaya Chernogryazskaya St., Moscow, 105062
Наталья Валерьевна Боровкова — д-р мед. наук, заведующаяотделением биотехнологий и трансфузиологии
пл. Большая Сухаревская, д. 3, Москва, 129090
Natalia V. Borovkova — Dr. of Med. Sci., head of the department of biotechnology and transfusiology
Bolshaya Sukharevskaya Square 3, Moscow, 129090
Павел Васильевич Макаров — д-р мед. наук, ведущий научныйсотрудник отдела травматологии и реконструктивной хирургии
ул. Садовая-Черногрязская, д. 14/19, Москва, 105062
Pavel V. Makarov — Dr. of Med. Sci., leading researcher, department of traumatology and reconstructive surgery
14/19, Sadovaya Chernogryazskaya St., Moscow, 105062
Дмитрий Андреевич Боженко — аспирант-офтальмолог
ул. Садовая-Черногрязская, д. 14/19, Москва, 105062
Dmitry A. Bozhenko — PhD student, leading researcher, department of traumatology and reconstructive surgery
14/19, Sadovaya Chernogryazskaya St., Moscow, 105062
Иван Николаевич Пономарев — канд. мед. наук, хирург, старший научный сотрудник лаборатории трансплантации клеток и иммунотипирования
пл. Большая Сухаревская, д. 3, Москва, 129090
Ivan N. Ponomarev — Cand. of Med. Sci., senior researcher, laboratory of cell transplantation and immunotyping
Bolshaya Sukharevskaya Square 3, Moscow, 129090
Майя Викторовна Сторожева — научный сотрудник, отделение биотехнологий и трансфузиологии
пл. Большая Сухаревская, д. 3, Москва, 129090
Maya V. Storozheva — researcher, department of biotechnology and transfusiology
Bolshaya Sukharevskaya Square 3, Moscow, 129090
Максим Сергеевич Макаров — канд. биол. наук, старшийнаучный сотрудник, отделение биотехнологий и трансфузиологии
пл. Большая Сухаревская, д. 3, Москва, 129090
Maxim S. Makarov — Cand. of Biol. Sci., senior researcher, department of biotechnology and transfusiology
Bolshaya Sukharevskaya Square 3, Moscow, 129090
Цель работы — оценить биологический эффект комбинации лизата тромбоцитов и амниотической мембраны, консервированной разными способами, на примере культуры буккального эпителия человека. Материал и методы. Исследованы трансплантаты амниона человека, консервированные тремя способами: силиковысушивание, лиофилизация, криоконсервирование. В качестве источника тромбоцитов использовали кровь здоровых добровольцев, из которой выделяли богатую тромбоцитами плазму (БоТП) с содержанием тромбоцитов свыше 1000 тыс/мкл, замораживали при -80 °С и размораживали при 0–4 °С с целью получения лизата БоТП. Для оценки ростостимулирующего эффекта трансплантатов амниона исследовали следующие группы: контроль 1 — без амниона и без лизата БоТП; контроль 2 — лизат БоТП без амниона; 1-я опытная группа — амнион без лизата БоТП; 2-я опытная группа — образцы амниона, совмещенные с лизатом БоТП. Исследование проводили на примере культуры буккального эпителия человека 3–5-го пассажа. Динамику роста клеток оценивали через 1, 2 и 3 сут с момента посева. Число клеток и их жизнеспособность оценивали с помощью оригинальных методов, основанных на витальном окрашивании клеток и их исследовании с помощью флуоресцентного микроскопа. Результаты. Все образцы консервированных амнионов были нетоксичными и не нарушали структурно-функциональных характеристик буккального эпителия. Использование амниона без лизата БоТП не оказывало ростостимулирующего действия на клетки. Среди образцов амниона, совмещенных с лизатом БоТП, наиболее эффективной в течение всего срока исследования была комбинация лиофилизированного амниона и БоТП. Заключение. Силиковысушивание, лиофилизация и криоконсервирование амниотической мембраны позволяют получить биосовместимые и нетоксичные трансплантаты. Для насыщения трансплантатов амниона лизатом БоТП наиболее оправданно использовать лиофилизированные амнионы. Комбинация лиофилизированного амниона и лизата БоТП стимулирует рост клеток in vitro без нарушения их структурной целостности.
Purpose: To study the biological effect of a combination of platelet lysate and amniotic membrane, preserved by various techniques, on human buccal epithelium culture. Materials and methods. Human amnion transplants were preserved using 3 methods: silicate drying, lyophilization, cryopreservation. The blood of healthy volunteers was used as a source of platelets. Platelet-rich plasma (PRP) with a platelet content over 1000 thousand/mcl and more was isolated from the donors blood, frozen at -80 °С and defrosted at 0–4 °С to prepare platelet lysate. Growth-stimulating effect of the amnion transplants was studied in different groups: control group 1 — without amnion and without PRP lysate; control group 2 — PRP lysate without amnion; experimental group 1 — amnion without PRP lysate; experimental group 2 — amnion samples combined with PRP lysate. The study was carried out on the example of human buccal epithelium culture of 3–5 passages. The dynamics of cell growth was evaluated after 1, 2 and 3 days from the moment of seeding. The number of cells and their viability were evaluated using original methods based on vital cell staining and their examination in a fluorescent microscope. Results. All samples of preserved amnions were non-toxic and did not damage the structural and functional characteristics of the buccal epithelium. On the other hand, the use of amnion without PRP lysate did not have a growth-stimulating effect on cells. Among the amnion samples combined with PRP lysate, the combination of lyophilized amnion and PRP lysate was the most effective during the entire study period. Conclusions. Silicate drying, lyophilization and cryopreservation of the amniotic membrane makes it possible to obtain biocompatible and non-toxic transplants, based on human amnion. Lyophilized amnions are the most optimal for saturating PRP lysate. The combination of lyophilized amnion and PRP lysate stimulates cell growth in vitro without violating their structural integrity.
The authors declare that there are no conflicts of interest present.