Регуляция активности коллагенолитических ферментов с помощью тромбоцитных препаратов in vitro

Цель работы — оценить in vitro влияние тромбоцитных препаратов на активность коллагенолитических ферментов. Материал и методы. В качестве коллагеновых матриксов использовали трансплантаты амниона человека и коллагеновые повязки на основе коллагена I типа человека. В качестве источника коллагенолитических ферментов использовали препарат Ферменкол. Исследовали тромбоцитные препараты: богатая тромбоцитами плазма (БоТП); концентрированная суспензия тромбоцитов, отмытых от плазмы (ОтмТр); бедная тромбоцитами плазма (БедПл); лизаты БоТП, БедПл и ОтмТр. Для оценки антиколлагенолитической активности определяли уровень автофлуоресценции коллагена тканевых трансплантатов, концентрацию коллагена в растворе, интенсивность пролиферации мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток (ММСК) на поверхности трансплантатов. Результаты. Препараты на основе БоТП и ОтмТр вызывали значительное ингибирование коллагенолитической активности, которое отсутствовало при использовании БедПл. Интенсивность подавления коллагенолитических ферментов в БоТП и ОтмТр зависела от исходного содержания тромбоцитов с гранулами. Тромбоцитные препараты значительно усиливали адгезию и рост ММСК на поверхности амниона и коллагеновой повязки. Заключение. Использование тромбоцитарных лизатов позволяет получить препараты, в которых совмещается подавление коллагенолитической активности и ростстимулирующий эффект, который сохраняется даже при разведении лизата БоТП в отношении 1:200. Для эффективного ингибирования коллагенолитических ферментов рекомендуется использовать БоТП с исходной концентрацией тромбоцитов с гранулами не менее 350 тыс/мкл.

1. Anitua E, Zalduendo M, Troya M, Alkhraisat MH, Blanco-Antona LA. Platelet-rich plasma as an alternative to xenogeneic sera in cell-based therapies: A need for standardization. Int J Mol Sci. 2022; 23 (12): 6552. doi: 10.3390/ijms23126552

2. Henschler R, Gabriel C, Schallmoser K, Burnouf T, Koh MBC. Human platelet lysate current standards and future developments. Transfusion. 2019; 59: 1407–13. doi: 10.1111/trf.15174

3. Hargett LA, Bauer NN. On the origin of microparticles: From “platelet dust” to mediators of intercellular communication. Pulm Circ. 2013; 3 (2): 329–40. doi: 10.4103/2045-8932.114760

4. Jiang LB, Su DH, Liu P, et al. Shape-memory collagen scaffold for enhanced cartilage regeneration: native collagen versus denatured collagen. Osteoarthritis Cartilage. 2018; 26 (10): 1389–99. doi: 10.1016/j.joca.2018.06.004

5. Ченцова Е.В., Боровкова Н.В., Макаров П.В. и др. Биологический эффект комбинации лизата тромбоцитов и амниотической мембраны в культуре буккального эпителия. Российский офтальмологический журнал. 2022; 15 (4): 115–20. https://doi.org/10.21516/2072-0076-2022-15-4-115-120

6. Villeneuve J, Block A, Le Bousse-Kerdil s MC, et al. Tissue inhibitors of matrix metalloproteinases in platelets and megakaryocytes: a novel organization for these secreted proteins. Exp Hematol. 2009; 37 (7): 849–56. doi: 10.1016/j.exphem.2009.03.009

7. Nejad AR, Hamidieh AA, Amirkhani MA, Sisakht MM. Update review on five top clinical applications of human amniotic membrane in regenerative medicine. Placenta. 2021; 103: 104–19. doi: 10.1016/j.placenta.2020.10.026

8. Ермолов А.С., Смирнов С.В., Хватов В.Б. и др. Биологическая повязка для лечения ожогов. Патент РФ № 2314129; 2008.

9. Боровкова Н.В., Макаров М.С., Андреев Ю.В., Сторожева М.В., Пономарев И.Н. Оценка цитокинового состава сыворотки крови и препаратов на основе тромбоцитов человека. Молекулярная медицина. 2021; 19 (3): 51–7. https://doi.org/10.29296/24999490-2021-03-08

10. Степанченко Н.С., Новикова Г.В., Мошков И.Е. Количественное определение содержания белка. Физиология растений. 2011, 58 (4): 624–30.

11. Смирнов В.А., Климочкин Ю.Н. Аминокислоты и полипептиды: учебное пособие. Часть I. Самара. Самарский гос. техн. ун-т. 2007.

12. Макаров М.С., Сторожева М.В., Боровкова Н.В. Значение автофлюоресценции коллагеновых волокон для оценки биологических свойств тканевых трансплантатов. Современные технологии в медицине. 2017; 9 (2): 83–90. https://doi.org/10.17691/stm2017.9.2.10